软件构建系统发育树对分离所得菌株进行鉴定
更新日期:2021-11-26     浏览次数:18
核心提示:2.2.1 样品采集参照罗强等[2]方法,采集云南省富源县农家天然发酵酸菜样品,用无菌移液器吸取混合均匀的酸菜汁液快速装入30%的无菌甘油管中,置于采样

2.2.1 样品采集  参照罗强等[2]方法,采集云南省富源县农家天然发酵酸菜样品,用无菌移液器吸取混合均匀的酸菜汁液快速装入30%的无菌甘油管中,置于采样箱中,冰浴状态下带回实验室,−80 ℃保存备用。

 

2.2.2 乳酸菌分离  将保存于 30%甘油中的样品进行10倍梯度稀释,按1%比例接种到添加0.1% 抗坏血酸的MRS肉汤中,37℃厌氧条件下培养24 h,富集后将培养液梯度稀释接种于1%碳酸钙-MRS琼脂培养基上,37℃厌氧培养48 h,挑取菌落形态不同,并有明显溶钙圈的单菌落,纯化3次后保存备用[3]

 

2.2.3乳酸菌鉴定  ① 革兰氏染色、接触酶试验:将分离所得菌株分别通过革兰氏染色试验、接触酶测定试验鉴定。②分子生物学鉴定:分离得到的4株疑似菌株委托安徽通用生物科技有限公司进行16S rDNA测序,测定序列后分析比对并通过clustalX 2.0和Mega4.0软件构建系统发育树对分离所得菌株进行鉴定[4]