利用SnapGene 设计特异性引物
更新日期:2022-01-14     浏览次数:4
核心提示:2.3基因组的提取以及遗传转化载体的构建根据 SanPrep 柱式 DNA 提取试剂盒(上海生工,B518261-0050)提供的方法提取7d龄(将种子播种在1/2 MS固体平

2.3基因组的提取以及遗传转化载体的构建

根据 SanPrep 柱式  DNA 提取试剂盒(上海生工,B518261-0050)提供的方法提取7d龄(将种子播种在1/2 MS固体平板上记为第1 d)哥伦比亚生态型拟南芥的基因组。利用SnapGene 设计特异性引物。以基因组为模板扩增得到ABF3的上游序列,扩增后的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测,使用DNA回收试剂盒(上海生工,B110092-0050)对ABF3上游序列回收纯化,将纯化后的片段双酶切后(Spe I TAKARA,1086A,Hind III TAKARA,1060A)经T4 Ligase(TAKARA,2040A)连接至植物遗传转化载体pCAMBIA1304上,转化大肠杆菌,挑选阳性克隆。提取质粒经酶切鉴定片段位置与目的片段大小相同后送至金唯智有限公司(苏州)测序,所采用的酶切、连接、转化以及质粒提取均参照分子克隆实验指南的方法[12]