析INHBB蛋白的氨基酸序列使用EXPASY在线网站进行
更新日期:2022-05-24     浏览次数:42
核心提示:1.4生物信息学分析INHBB基因对应的氨基酸序列排列图用BioXM2.6软件获得。分析INHBB蛋白的氨基酸序列使用EXPASY在线网站进行。通过NCBI的BLAST分析犏牛

1.4 生物信息学分析    

INHBB基因对应的氨基酸序列排列图用BioXM2.6软件获得。分析INHBB蛋白的氨基酸序列使用EXPASY在线网站进行。通过NCBI的BLAST分析犏牛与其它9个物种INHBB核苷酸序列同源性,并利用MEGA软件得出10个物种的INHBB核苷酸系统进化树。其他分析软件参考李鹏程等文献[18]。

1.5 实时荧光定量 PCR    

荧光定量操作步骤按照生工生物工程股份有限公司的 2×SG Fast qPCR Master Mix试剂盒的说明书进行,检测INHBB基因在犏牛附睾三个不同组织区段的差异表达。PCR反应体系10 μL:2×SG Fast qPCR Master Mix 5 μL,混匀的上下游引物(IF2、IR2)0.8 μL,无菌去离子水3.1 μL,cDNA 0.5 μL,ddH2O 0.6 μL。反应程序:94 ℃ 预变性2 min,95 ℃ 变性30S,55 ℃ 退火30 S,72 ℃ 延伸30 S,重复30次,72 ℃延伸2 min。